Criopreserved ovarian tissue transplantation and bone restoration metabolism in castrated rats / Transplante de tecido ovariano criopreservado e restauração do metabolismo ósseo em ratas castradas

ABSTRACT Objectives: to evaluate estradiol levels and autotransplantation heated ovarian tissue effects, after vitrification, on rats bone metabolism previously oophorectomized bilaterally. Methods: experimental study with 27 rats aged 11 to 12 weeks and weighing 200g to 300g, submitted to bilateral oophorectomy and ovarian tissue cryopreservation for subsequent reimplantation. Animals were divided into two groups, A and B, with 8 and 19 rats, respectively. Autotransplantation occurred in two periods according to castration time: after one week, in group A, and after one month in group B. Serum estradiol measurements and ovary and tibia histological analysis were performed before and after oophorectomy period (early or late) and one month after reimplantation. Results: in groups A and B, tibia median cortical thickness was 0.463±0.14mm (mean±SD) at the baseline, 0.360±0.14mm after oophorectomy and 0.445±0.17mm one month after reimplantation p<0.005). Trabecular means were 0.050±0.08mm (mean±SD) at baseline, 0.022±0.08mm after oophorectomy and 0.049±0.032mm one month after replantation (p<0.005). There was no statistical difference in estradiol variation between the two study groups (p=0.819). Conclusion: cryopreserved ovarian tissue transplantation restored bone parameters, and these results suggest that ovarian reimplantation in women may have the same beneficial effects on bone metabolism.

RESUMO Objetivos: avaliar os níveis de estradiol e os efeitos do autotransplante de tecido ovariano aquecido, após vitrificação, no metabolismo ósseo de ratas previamente ooforectomizadas bilateralmente. Métodos: trabalho experimental com 27 ratas com idades entre 11 e 12 semanas e pesando 200g a 300g, submetidas à ooforectomia bilateral e criopreservação de tecido ovariano para posterior reimplante. Os animais foram divididos em dois grupos, A e B, com oito e 19 ratas, respectivamente. O autotransplante ocorreu em dois períodos de acordo com o tempo de castração: após uma semana, no grupo A, e após um mês no grupo B. Mensurações de estradiol sérico e análise histológica de ovário e tíbia foram feitos antes e após o período de ooforectomia (precoce ou tardio) e um mês após o reimplante. Resultados: nos grupos A e B, as espessuras corticais médias da tíbia foram 0,463±0,14mm (média±DP) na linha de base, 0,360±0,14mm após ooforectomia e 0,445±0,17mm em um mês após o reimplante (p<0,005). As médias trabeculares foram 0,050±0,08mm (média±DP) na linha de base, 0,022±0,08mm após ooforectomia e 0,049±0,032mm em um mês após o reimplante (p<0,005). Não houve diferença estatística entre a variação do estradiol entre os dois grupos de estudo (p=0,819). Conclusão: o transplante de tecido ovariano criopreservado restabeleceu os parâmetros ósseos, e estes resultados sugerem que a reimplantação ovariana em mulheres pode apresentar os mesmos efeitos benéficos sobre o metabolismo ósseo.

Biochemical, thermographic, and follicular responses of murine models of hormone-treated bovine ovarian renal capsule xenografts / Respostas bioquímicas, termográficas e foliculares de modelos murinos tratados hormonalmente após xenotransplante de ovário bovino sob a cápsula renal

This study aimed to evaluate the characteristics of two different murine models of hormone-treated renal-encapsulated bovine ovarian tissue xenotransplantation. Two immunodeficient mouse models (BALB/c Nude and C57BL6 SCID) were xenografted with ovarian pieces from heifers and each group was subjected to two hormonal treatments of eCG or a combination of FSH+LH. Donor ovaries and recipients were evaluated by histology and infrared thermography at different times. At the time of xenograft collection, animals were evaluated for alterations in hepatorenal biochemistry. The statistical test used in the study was ANOVA, followed by Tukey's test. Among the strains, 80% of C57BL6 SCID and 77% of BALB/c Nude mice showed development and vascularization of the transplanted tissue, which acquired cyclicity at 19 and 9 days post-transplant, respectively. Hemorrhagic follicles in xenografts induced with FSH+LH were found in the C57BL6 SCID strain. Infrared thermography was insufficient to distinguish the tissue donor recipient. In conclusion, the C57BL6 SCID strain appears to be the best host for ovarian xenografts, since the transplants in these mice were viable and showed robust follicular development. This work will aid future choices of immunodeficient strains for xenografting procedures.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar as características dos dois diferentes modelos de murinas tratadas hormonalmente após xenotransplante de tecido ovariano bovino sob a cápsula renal. Dois modelos de camundongos imunodeficientes (BALB/c NUDE e C57BL6 SCID) receberam fragmentos de ovário de novilhas e cada grupo foi submetido a dois tratamentos hormonais de eCG ou uma combinação de FSH+LH. Ovários doadores e receptores foram avaliados por histologia e termografia infravermelha em diferentes momentos. No momento da retirada do xenotranplante, os animais foram avaliados quanto a alterações na bioquímica hepatorrenal. O teste estatístico utilizado no estudo foi ANOVA, seguido do teste de Tukey. Entre as linhagens, 80% de C57BL6 SCID e 77% das BALB/c NUDE mostraram desenvolvimento e vascularização do tecido transplantado, que adquiriu a ciclicidade 19 e 9 dias após o transplante, respectivamente. Corpos hemorrágicos foram encontrados após o xenotransplante induzidos com FSH+LH na linhagem C57BL6 SCID. A termografia infravermelha foi insuficiente para distinguir o tecido doador do receptor. Em conclusão, a linhagem C57BL6 SCID demonstrou ser o melhor hospedeiro para xenotransplante de ovário, uma vez que os transplantes nestes camundongos foram viáveis e mostraram desenvolvimento folicular. Este trabalho ajudará futuras escolhas de linhagens imunodeficientes para procedimentos de xenotranplante.(AU)

Endocrine integration of fetal ovaries grafted under kidney capsule of unilaterally or bilaterally orchidectomized male hamster / Integración endocrina de ovarios fetales trasplantados bajo la cápsula renal de hámster machos uni o bilateralmente castrados

Mammalian ovary development undergoes important changes during the perinatal period, moment when follicles are assembled and start to develop in a process not well known, involving endocrine and paracrine factors. In order to investigate the effect of two different hormonal environments on the early development of the ovary, we used an autologous transplant model in which Syrian hamster fetal ovaries were grafted under the kidney capsule of males hosts previously unilaterally or bilaterally orchidectomized. After 35 days of graft, ovaries and kidney parenchyme of the host male did not present signs of rejection. Ovaries contained primordial, primary follicles, secondary follicles and few tertiary follicles with morphological features similar to ovaries of control females of 35 days of age. Healthy primary and secondary follicles of experimental groups had frequency distribution and size similar to control ovaries but tertiary follicles were scarce in control as well as in grafts where they were mainly atretic. PCNA, marker of proliferation, was immuno detected in granulosa cells of growing follicles and the marker of apoptosis, Caspase 3 active, was evident mainly in secondary follicles. Immunoreactivity for steroidogenic proteins, StAR, 3-bHSD and aromatase detected in the follicular wall cells and the decreased serum levels of FSH without important changes in testosterone in bilateral orchidectomized males that received ovarian graft, and testosterone decreased without changes in FSH levels in unilateral orchidectomized males (UO) with ovarian graft, all together suggest the effect of steroid hormones produced by the ovary. In conclusion, the experimental model of autologous transplant presents evidence of early ovary development under the kidney capsule and its functional integration to the endocrine axis of the host male.

El desarrollo del ovario en mamíferos sufre importantes cambios durante el periodo perinatal, momento en el cual los folículos se ensamblan y comienzan a desarrollarse en un proceso no muy dilucidado que involucra señales endocrinas y paracrinas. Con el objetivo de investigar el efecto de dos ambientes hormonales sobre el desarrollo temprano del ovario de hamster, usamos un modelo de trasplante autólogo en el que ovarios fetales fueron trasplantados bajo la cápsula renal de machos receptores previamente castrados y hemicastrados. Después de 35 días de trasplante, los ovarios y el parénquima renal de los machos receptores no presentaron señales de rechazo. El ovario presentó folículos primordiales, primarios, secundarios y algunos folículos terciarios con características morfológicas similares a los ovarios de hembras controles de 35 días de edad. Folículos primarios y secundarios sanos de ambos grupos experimentales se encontraron en frecuencia y tamaño similar al de ovarios controles, los folículos terciarios fueron escasos tanto en controles como en ovarios trasplantados, siendo en éstos principalmente atrésicos. PCNA, un marcador de proliferación celular, fue detectado por inmunohistoquímica en células granulosas de folículos en crecimiento, mientras que caspasa 3 activa, un marcador de apoptosis, fue evidente en folículos secundarios. Por otra parte, inmunoreactividad para proteínas esteroidogénicas, StAR, 3-bHSD y aromatasa, fue detectada en la pared folicular. Esta observación, junto a la disminución de niveles séricos de FSH, sin cambios importantes en los niveles de testosterona en machos castrados que recibieron trasplantes ováricos, y la disminución en los niveles de testosterona sin cambios en los niveles de FSH en machos hemicastrados con trasplantes ováricos, sugiere que el ovario no solo produce hormonas esteroidales sino que además éstas modifican los niveles hormonales del macho receptor del trasplante. En conclusión, este modelo de trasplante autólogo agrega información del desarrollo ovárico temprano cuando éste se desarrolla bajo la cápsula renal de machos entregando evidencia de la integración funcional del ovario trasplantado al eje endocrino de los machos receptores.

Toward precision medicine for preserving fertility in cancer patients: existing and emerging fertility preservation options for women / 부인종양

As the number of young cancer survivors increases, quality of life after cancer treatment is becoming an ever more important consideration. According to a report from the American Cancer Society, approximately 810,170 women were diagnosed with cancer in 2015 in the United States. Among female cancer survivors, 1 in 250 are of reproductive age. Anticancer therapies can result in infertility or sterility and can have long-term negative effects on bone health, cardiovascular health as a result of reproductive endocrine function. Fertility preservation has been identified by many young patients diagnosed with cancer as second only to survival in terms of importance. The development of fertility preservation technologies aims to help patients diagnosed with cancer to preserve or protect their fertility prior to exposure to chemo- or radiation therapy, thus improving their chances of having a family and enhancing their quality of life as a cancer survivor. Currently, sperm, egg, and embryo banking are standard of care for preserving fertility for reproductive-age cancer patients; ovarian tissue cryopreservation is still considered experimental. Adoption and surrogate may also need to be considered. All patients should receive information about the fertility risks associated with their cancer treatment and the fertility preservation options available in a timely manner, whether or not they decide to ultimately pursue fertility preservation. Because of the ever expanding number of options for treating cancer and preserving fertility, there is now an opportunity to take a precision medicine approach to informing patients about the fertility risks associated with their cancer treatment and the fertility preservation options that are available to them.

Histological study of rat ovaries cryopreserved by vitrification or slow freezing and reimplanted in the early or late postmenopausal stage

PURPOSE: To compare two rat ovary cryopreservation techniques (vitrification vs. slow freezing) and two postmenopausal stages (early vs. late) with regard to graft take. METHODS: Thirty-three Wistar rats were submitted to bilateral oophorectomy. One ovary was submitted to histological analysis while the other was cryopreserved by slow freezing or vitrification. The cryopreserved ovary was thawed and reimplanted in the greater omentum one week (early menopause) or one month (late menopause) after oophorectomy. One month after ovary reimplantation, the graft take was evaluated macroscopically and histologically. RESULTS: Six of the animals were used ascontrols and seven died. The histological findings of 20 animals included atretic follicles (n=4), primordial follicles (n=2), and corpus luteum with primordial follicles (n=3). No ovarian tissue was found in 11 animals. Vitrification resulted in a higher graft take rate than slow freezing (50% vs. 38.5%), but the difference was not statistically significant. However, the graft take rate was 9.3 times higher in the early than in the late postmenopausal stage (61.5% vs. 14.3%) (p=0.043). CONCLUSION: Vitrification was superior to slow freezing as ovarian cryopreservation technique, and grafting was significantly more successful when the ovary was reimplanted in the late postmenopausal stage. .

N-acetylcysteine improves morphologic and functional aspects of ovarian grafts in rats

PURPOSE: To evaluate morphological and functional aspects of the ovarian graft in transplanted rats treated with NAC. METHODS: Female Wistar rats, virgin, 3 to 4 months old, weighing 200-250 grams were used in experiments. The rats have been kept in proper sanitary conditions, receiving food and water ad libitum. Five groups (n=10, each) were constituted: 4 groups treated subcutaneously with NAC, at doses of 150, 300, 600 and 1200 mg/kg (NAC150, NAC300, NAC600 and NAC1200, respectively), one hour of before the ovarian transplantation and control group (GTx) - treated with physiological solution and submitted to ovarian transplantation. The rats were anesthetized and submitted to autologous left ovarian transplantation, without anastomosis in retroperitoneum, and contralateral oophorectomy. During follow-up of 4 or 15 days, the estrous cycle was evaluated by vaginal smears to determine cycle regularity. At the end of 4th or 15th days, rats were re-anesthetized and blood and graft were obtained to estradiol analysis and morphological assessment. Data were analysed by One Way Analysis of Variance (ANOVA) or ANOVA on ranks complemented by Student-Newman-Keuls test. RESULTS: At 4th day, viable follicles in the graft did not altered by NAC treatments. The NAC300 and NAC600 groups showed increasing in follicle atresia (p=0.012) compared to GTx and NAC1200 group. At 15th day, 50% of GTx, NAC150, and NAC300 rats showed regular oestrous cycle; 83% of NAC600 and 100% of NAC1200 rats returned to regular cycle. NAC1200 group showed increasing in primordial follicle compared to GTx, NAC150 or NAC300 (p=0.011). NAC did not interfere in estradiol levels after 4 or 15 days of transplantation. CONCLUSION: In autologous ovarian transplantation, high dose of NAC promotes graft viability with recovery of estrous cycle. .

Experimental ovarian transplantation on stomach for bone repair in ovariohysterectomized rabbits

PURPOSE: To evaluate the bone repair process in ovariohysterectomized rabbit submitted to an ovarian transplant to stomach that may supplying some quantity of estrogen occurs to improve bone healing. METHODS: In 20 female rabbits three holes of 1, 2 and 3mm diameter in tibial shaft were made and after that all animals received OHE through a ventral incision and they were randomly divided into two groups of ten rabbits each. In group one, animals received one of their self-ovaries that transplanted on serosal layer of stomach and group two did not receive treatment. Animals were kept during bone healing for a period of 45 days and radiological, biochemical, biomechanical and histopathological evaluation. RESULTS: The tibial defects in group one healed completely after 45 days and had more callous than second group. There is significant difference between two groups after operation in 21, 28 and 35 days about estrogen, progesterone and phosphatase Alkaline. The maximum forces in group one, were significantly higher than that for the group two. CONCLUSION:Ovarian transplantation prevents the effects of ovariohysterectomized on bone healing of rabbit tibia, suggesting that unilateral transplanted ovaries can substitute for the action of ovaries on the skeleton in ovariohysterectomized animals.

Autologous and allogeneic ovarian orthotopic transplantation: morphologic, endocrinologic and natural pregnancy assessment

PURPOSE: To assess pregnancy of rabbits submitted to bilateral ovariectomy and orthotopic allogeneic or autologous intact and sliced ovarian transplantation without a vascular pedicle and to determine the morphofunctional aspects of the transplanted ovaries. METHODS: Fifty-six female rabbits were studied. The ovaries were removed and orthotopically transplanted or replaced without vascular anastomoses: Group 1 (n=8), only laparotomy and laparorrhaphy, Group 2A (n=8) intact ovaries were transplanted on both sides, Group 2B (n=8) both ovaries were sliced and orthotopically transplanted, Group 2C (n=8), an intact ovary was transplanted on one side and a sliced ovary on the other side. In Group 3 the ovaries were reimplanted according to the procedure and subgroups described for Group 2. Three months later, the animals were paired with males for copulation. Estradiol, progesterone, FSH and LH hormone levels were assessed. A histologic study was carried out, and the number of pregnancies and litters were also determined. Chi-square test compared the number of pregnancies and litters. One-way ANOVA and the Tukey-Kramer tests compared the hormonal dosages. RESULTS: Pregnancies occurred in seven (87.5%) rabbits of Group 1, in three rabbits (37.5%) of Groups 2A and 3A, in four rabbits (50%) of groups 2B, 3B and 3C, and in five (62.5%) of group 2C. Normal hormone serum levels and histology confirmed the vitality of all ovaries. CONCLUSION: Orthotopic allogeneic and autologous ovarian transplantation without a vascular pedicle is viable in rabbits, and preserves their hormonal levels and fertile functions.

Fertility preservation among the cancer patients by ovarian tissue cryopreservation, transplantation, and follicular development

Ovarian tissue freezing or cryopreservation might be the only acceptable method for preserving the young women fertility, before radiotherapy or chemotherapy. This technology might be used for patients with recurrent ovarian cysts or endometriosis, without ovarian stimulation. Many efforts have made to improve cryopreservation conditions that should be seriously considered for cancer patients. Vitrification is a process which prevents ovarian tissue from cryo damage, then preserves cell viability. Both methods have used for evaluating not only the follicular development, but also the fertility after freezing and thawing. In this manuscript, we have discussed the techniques of ovarian tissue vitrification, then graft and maturation or follicular development is also mentioned

Transplante experimental, subcutâneo e intraperitoneal, de ovário em suínos: estudo histomorfométrico e imunoistoquímico / Experimental transplantation, subcutaneous and intraperitoneal, ovary in pigs: immunohistochemical and histomorphometric study

O transplante autólogo de tecido ovariano constitui alternativa relevante na preservação da fertilidade e da função hormonal ovariana em mulheres sujeitas à falência ovariana prematura e infertilidade, por causas malignas, tratamentos adjuvantes ou cirurgias. É a única opção para crianças, fase pré-puberal e para mulheres que não podem retardar a quimioterapia ou não podem ser submetidas à estimulação do ciclo. O transplante ovariano autólogo pode ser, quanto ao local de reimplantação, ortotópico ou heterotópico e, quanto à conservação, a fresco ou após o período de criopreservação. As várias etapas envolvidas neste transplante são estudadas mundialmente na atualidade, como a retirada e preservação do tecido ovariano, as técnicas de criopreservação, o local apropriado para o reimplante e as possibilidades de redução da perda folicular. A avaliação da apoptose - morte celular programada - é útil na avaliação da rejeição e viabilidade dos enxertos de transplantes estabelecidos na prática clínica, tanto autólogos como heterólogos. Com o intuito de utilizar animais de maior porte, conseguir seguimento de médio prazo e realizar os procedimentos cirúrgicos por via laparoscópica, padrão ouro em humanos, o presente estudo utilizou como modelo experimental fêmeas suínas, em idade reprodutiva, da raça Minipig. Este projeto teve como propósito avaliar a influência da criopreservação e do local de implante na qualidade e na viabilidade do transplante autólogo de ovário, a fresco e após criopreservação, no tecido celular subcutâneo e na região intraperitoneal peri-infundibular. Foram avaliados a quantidade e a densidade folicular dos implantes e os aspectos morfológicos e histomorfométricos, bem como a apoptose, por meio da imunoexpressão de proteínas proapoptóticas- Bax e antiapoptóticas-Bcl-2, além da Caspase 3-clivada, fase final das vias extrínseca e intrínseca dos mecanismos de apoptose.Quarenta animais foram divididos em cinco grupos: Controle com ooforectomia...

Autotransplantation of ovarian tissue is an important alternative to preserve fertility and hormonal ovarian function in women undergoing ovarian failure and premature infertilidade, because of cancer or surgery. It is the only option for infants, pre-pubertal patients and for women who can not delay chemotherapy or not may be subjected to stimulation of the cycle. The various steps involved in the transplant are studied worldwide today, as the removal and preservation of ovarian tissue, the techniques of cryopreservation, the appropriate site and mechanisms to reduce follicular loss. Assessment of apoptosis - programmed cell death-is useful in the study of the viability of the grafts and rejection of transplants established in clinical practice, both autologous and heterologous. In order to use larger animals, getting following medium term (over 21 days) and to perform surgical procedures by laparoscopy (gold standard in humans), this study used an experimental model sows, reproductive age, Minipig race. This project aims to evaluate the influence of cryopreservation and implantation site of the quality and viability of ovarian autografts, fresh and after cryopreservation, at subcutaneous site and at intraperitoneal site. We analyzed the quantity and density of follicular implants and the morphological and histomorphometric as well as apoptosis, by proteins immunoexpression antiapoptotic and proapoptotic. Forty animals were divided into five groups: Control with oophorectomy (Group I), oophorectomy and fresh transplantation to subcutaneous site (Group II), oophorectomy and fresh transplantation to intraperitoneal site (Group III), oophorectomy and transplantation of cryopreserved ovarian tissue to subcutaneous site (Group IV) and oophorectomy and transplantation of cryopreserved ovarian tissue to intraperitoneal site (Group V). We concluded that the autologous ovarian transplantation was feasible in the technical proposals, in subcutaneous and...

Study on the vaginal smear of rats submitted to autologous ovarian transplant: impact of remote ischemic preconditioning / Estudo do esfregaço vaginal de ratas submetidas a transplante autólogo de ovário: impacto do precondicionamento isquêmico remoto

PURPOSE: To evaluate the remote ischemic preconditioning (R-IPC) impact on the quality of the ovarian graft by means of vaginal smear of transplanted rats. METHODS: Sixty rats were used divided in six groups: Control; Fresh transplant (TxF); Cryopreserved transplant (TxC); R-IPC; R-IPC + fresh transplant (TxF+R-IPC); R-IPC + cryopreserved transplant (TxC+R-IPC). R-IPC was performed in the common iliac artery. Autologous ovarian tissue was implanted integrally in the retro peritoneum. On the first PO day, vaginal smear collection was daily initiated. After 30 days, the PO day when the estrous cycle was re-initiated was considered for analysis as well as the estrous days and the number of estrous cycles. RESULTS: R-IPC showed a tendency to an early estrus re-initiation (p>0.05) as well as increase the number of cycles in the fresh transplanted group while in the cryopreserved transplant the number of cycles was similar, regardless of the stimulus R-IPC (p>0.05). The animals which had undergone fresh grafts had a longer estrous period than the ones which had undergone cryopreserved grafts, with or without R-IPC (p<0.05). CONCLUSION: R-IPC promoted earlier re-initiation of ovarian activity in the PO and greater estrous frequency, with more consistent results in the fresh grafts than in the cryopreserved ones.

OBJETIVO: Avaliar o impacto do precondicionamento isquêmico remoto (PCI-R) na qualidade do enxerto ovariano através dos esfregaços vaginais dos animais transplantados. MÉTODOS: Foram utilizadas 60 ratas, distribuídas em seis grupos de estudo: Controle; Transplante fresco; Transplante criopreservado; PCI-R; PCI-R + Transplante fresco; PCI-R + Transplante criopreservado. O PCI-R foi realizado na artéria ilíaca comum. O tecido ovariano foi implantado íntegro no retroperiônio. No 1º dia de pós-operatório (PO) foram coletados esfregaços vaginais diariamente. Após 30 dias foram considerados para análise o dia de PO de retorno do estro, assim como o número de dias em estro e de ciclos estrais. RESULTADOS: PCI-R mostrou tendência em reinício mais precoce do cilo estral (p>0,05), assim como aumento no número de cilcos estrais nos grupos com transplante fresco enquanto que no criopreservado o número de ciclos foi semelhante, independente do PCI-R (p>0,05). Os animais que receberam enxertos frescos apresentaram mais dias na fase estro do que os criopreservados, com ou sem PCI-R. CONCLUSÃO: O PCI-R promoveu retorno mais precoce da atividade ovariana no PO e maior freqüência de estro, sendo os resultados mais consistentes nos enxertos frescos do que nos criopreservados.

Indirect evaluation of estrogenic activity post heterotopic ovarian autograft in rats / Avaliação indireta da atividade estrogênica após transplante heterotópico de ovário em ratas

PURPOSE: To morphologically evaluate the estrogenic effect on the uterus and vagina of rats submitted to ovarian autografts. METHODS: Twenty Wistar EPM-1 adult rats were bilaterally ovariectomized, followed by ovarian transplants in retroperitoneal regions. The animals were divided in four groups of five animals, according to the day of euthanasia: G4, G7, G14 and G21, corresponding to the 4th, 7th, 14th and 21st day after surgery, respectively. Vaginal smears were collected from the first day of surgery until euthanasia day. After that, the vagina and uterus were removed, fixed in 10 percent formaldehyde and submitted to histological analysis and stained with hematoxiline and eosine. RESULTS: All animals showed estrous cycle changes during the experiment. In 4th day, the uterus showed low action of estrogen with small number of mitosis and eosinophils as well as poor development. On the 7th day, the endometrium was atrophic without mitotic signals and presented a small number of eosinophils. On the 14th and 21th days the histological findings were similar, with the presence of mitosis in the endometrial glands and intense leucocyte infiltration with a large number of eosinophils. Morphometric results showed that the endometrial and myometrial thickness as well as the number of eosinophils presented the highest values during the 14th and 21th days of the evaluation. The 7th day group also presented the lowest eosinophil numbers. Vaginal epithelium features were: 4th and 7th day groups presented non-keratinized stratified epithelium with 5 and 2 cell layers, respectively. The 14th and 21st day groups presented non-keratinized stratified epithelium with 14 and 15 cell layers. CONCLUSION: Experimental ovarian autografts in the evaluated organs presented maximum estrogen activity after the 21st day of surgery, according to morphological and morphometric data.

OBJETIVO: Avaliar morfologicamente a atividade estrogênica no útero e vagina de ratas submetidas a transplante autólogo de ovário. MÉTODOS: Foram utilizadas 20 ratas adultas, Wistar EPM-1, submetidas à ooforectomia bilateral seguida de transplante de ovário em retroperitônio, distribuídas em grupos, conforme a data pré-estabelecida para eutanásia, com cinco animais cada: G4, G7, G14 e G21 - eutanásia no 4º, 7º, 14º e 21º dia de pós-operatório, respectivamente. No 1º dia após a cirurgia foi iniciada coleta de esfregaço vaginal diariamente até o dia pré-estabelecido para eutanásia. Após a eutanásia foi realizada exérese em bloco da vagina e útero, que foram fixados em formol 10 por cento para processamento histológico e coloração pela Hematoxilina-Eosina. RESULTADOS: Todos os animais mostraram alterações do ciclo estral no decorrer dos dias do experimento. No 4º dia, o útero mostrava sinais de baixa atividade estrogênica, o endométrio apresentava poucas figuras de mitose, pouco desenvolvimento e pequena quantidade de eosinófilos. Já no 7º dia, o endométrio encontrava-se atrofiado, sem atividade mitótica e com raros eosinófilos. No 14º e 21º dias os achados foram semelhantes, com presença de mitose nas glândulas endometriais e intenso infiltrado leucocitário, com predomínio de eosinófilos. Os resultados da morfometria mostraram que tanto as espessuras endometrial e miometrial quanto o número de eosinófilos foram maiores no 14º e 21º dias de avaliação, com menores valores no 7º dia. As características do epitélio vaginal foram: epitélio pavimentoso não queratinizado no 4º e 7º (com cerca de cinco e duas camadas celulares, respectivamente) e pavimentoso queratinizado em no 14º e 21º dias (com cerca de 14 e 15 camadas celulares, respectivamente) CONCLUSÃO: O transplante experimental autólogo de ovário manteve a atividade estrogênica nos órgãos avaliados, com atividade estrogênica máxima ao final de 21 dias, conforme parâmetros morfológicos...

Aspectos endócrinos, morfológicos e gestacionais de transplante ortotópico autógeno ou homógeno de ovários íntegros e fatiados sem anastomose vascular / Endocrine, morphological and gestational aspects of intact and sliced autogynous or homogynous ovarian orthotopic transplantation without vascular pedicle

Objetivo: Avaliar a fertilização bem como aspectos endócrinos e histológicos do ovário após seu reimplante ou transplante ortotópico, sem anastomose vascular. Métodos: Foram utilizadas 56 coelhas da raça Nova Zelândia, variedade branca, e Califórnia distribuídas em: Grupo 1 (n = 8), controle, apenas laparotomia e laparorrafia; Grupo 2A (n = 8), com reimplante ortotópico de ovários íntegros; Grupo 2B (n = 8) com reimplante ortotópico de ovários fatiados; Grupo 2C (n = 8), com reimplantes ovarianos de um lado íntegro, e,do outro lado, fatiado; Grupo 3A (n = 8), com transplante ortotópico de ovários íntegros; Grupo 3B (n = 8), com transplante ortotópico de ovários fatiados; Grupo 3C (n = 8), com transplantes ovarianos de um lado íntegro e, do outro lado, fatiado. A partir do terceiro mês pós-operatório, cada coelha foi colocada para cópula. Dosaram-se o estradiol, a progesterona, o FSH e o LH no nono mês pós-operatório. Estudaram-se as morfologias macro e microscópicas dos ovários, tubas e útero de todos os animais. Os números de gestações e de filhotes foram avaliados por meio do teste do X2 e as dosagens hormonais foram comparadas pelo one-way ANOVA, seguido pelo teste de Tukey-Kramer. O nível de significância adotado foi de p < 0,05. Resultados: No Grupo 1, sete (87,5%) coelhas engravidaram entre o segundo e terceiro meses após início da cópula. No Grupo 2, as gestações ocorreram entre o quinto e o oitavo meses pós-operatório se, no Grupo 3, entre o quarto e o oitavo meses pós-operatórios. A porcentagem de gravidez observada foi de 37,5% no Grupo 2A, 50% no Grupo 2B e 2C, 37,5% no Grupo 3A, 50% no Grupo 3B e 62,5% no Grupo 3C. Os níveis hormonais e o estudo morfofuncional dos ovários, tubas e úteros não apresentaram alterações. Conclusões: O reimplante ou transplante ovariano homógeno ortotópico sem pedículo vascular é eficaz para a manutenção de níveis normais de hormônios ovarianos e permitiu a fertilização natural.

Transplante de tecido ovariano / Ovarian tissue transplant

O congelamento de tecido ovariano para ser transplantado é um procedimento que pode reservar a função reprodutiva e endócrina desse órgão no futuro. Constitui uma alternativa para pacientes jovens com câncer e submetidas a quimioterapia, sem prole constituída, que desejam engravidar. Embora a lesão celular e as modificações moleculares possam ocorrer em decorrência do processo de congelamento e de descongelamento, há relatos de transplantes bem sucedidos tanto em animais quanto em seres humanos. A técnica de congelamento pode ter aplicações nos programas de Reprodução Humana, além de poder ser útil para evitar eventuais repercussões do hipoestrogenismo em mulheres que foram ooforectomizadas precocemente devido ao tratamento de neoplasias.

Avaliação pós-transplante de ovários íntegros e fatiados sem anastomose vascular / Endocrinological, morphological and gestational assessment of intact and sliced ovarian orthotopic reimplantation or transplantation without vascular pedicle

OBJETIVO: Avaliar a fertilização, bem como aspectos endócrinos e histológicos do ovário após seu reimplante ou transplante ortotópico, sem anastomose vascular. MÉTODOS: Foram utilizadas 56 coelhas da raça Nova Zelândia Branca e Califórnia distribuídas em: Grupo 1 (n=8) - controle, apenas laparotomia e laparorrafia; Grupo 2A (n=8) - reimplante ortotópico de ovários íntegros; Grupo 2B (n=8) - reimplante ortotópico de ovários fatiados; Grupo 2C (n=8) - reimplantes ovarianos de um lado, íntegros, e, do outro lado, fatiados; Grupo Grupo 3A (n=8) - transplante ortotópico de ovários íntegros; Grupo 3B (n=8) - transplante ortotópico de ovários fatiados; Grupo 3C (n=8) - transplantes ovarianos de um lado, íntegros, e, do outro lado, fatiados. A partir do terceiro mês pós-operatório, cada coelha foi colocada para cópula. Dosou-se o estradiol, a progesterona, o FSH e o LH no nono mês pós-operatório. Estudou as morfologias macro e microscópicas dos ovários, tubas e útero, de todas os animais. Os números de gestações e de filhotes foram avaliados por meio do teste Qui-quadrado e as dosagens hormonais foram comparadas pelo one-way Anova, seguido pelo teste de Tukey-Kramer. RESULTADOS: No Grupo 1, sete (87,5 por cento) coelhas engravidaram entre o segundo e terceiro meses após início da cópula. No Grupo 2, as gestações ocorreram entre o quinto e o oitavo meses pós-operatórios e, no Grupo 3, entre o quarto e o oitavo meses pós-operatórios. A porcentagem de gravidez observada foi de 37,5 por cento no Grupo 2A, 50 por cento no Grupo 2B e 2C, 37,5 por cento no Grupo 3A, 50 por cento no Grupo 3B e 62,5 por cento no Grupo 3C. Os níveis hormonais e o estudo morfofuncional dos ovários, tubas e úteros não apresentaram alterações. CONCLUSÃO: O reimplante ou transplante ovariano homógeno ortotópico sem pedículo vascular é eficaz para a manutenção de níveis normais de hormônios ovarianos e permitiu a fertilização natural.

OBJETIVE: To assess the natural pregnancy and to determine the morphofunctional aspects of ovaries of rabbits submitted to bilateral oophorectomy and orthotopic allogeneic or autologous intact and sliced ovarian transplantation without a vascular pedicle. METHODS: Fifty-six female New Zealand White and California rabbits were studied. The ovaries were removed and orthotopically transplanted or replaced without vascular anastomoses: Group 1 (n = 8), only laparotomy and laparorrhaphy were performed; Group 2A (n = 8) intact ovaries were reimplanted on both sides; Group 2B (n = 8) both ovaries were sliced and orthotopically reimplanted; Group 2C (n = 8), an intact ovary was reimplanted on one side and a sliced ovary on the other side; Group 3A (n = 8) intact ovaries were transplanted on both sides, Group 3B (n = 8) both ovaries were sliced and orthotopically transplanted, Group 3C (n = 8), an intact ovary was transplanted on one side and a sliced ovary on the other side. Three months later, the females were paired with males for copulation. Estradiol, progesterone, follicle stimulating hormone and luteinizing hormone levels were assessed. The morphological aspect of the ovaries was studied and the number of pregnancies and litters were also determined.Tthe number of successful pregnancies and the number of litters was compared between the groups by the chi-square test. One-way ANOVA and the Tukey-Kramer tests compared the hormonal dosages. The significance was of p < 0.05. RESULTS: Pregnancies occurred in seven (87.5 percent) rabbits of Group 1, in 37.5 percent in Groups 2A and 3A, in 50 percent of groups 2B, 2C and 3B, and in 62.5 percent of group 3C. Hormone levels and histology confirmed the vitality of all ovaries. CONCLUSION: Intact or sliced orthotopic allogeneic and autologous ovarian transplantation without a vascular pedicle is viable in rabbits, and preserves their fertility and hormonal functions.

Estudo da viabilidade do enxerto de ovário na bolsa omental de ratos utilizando Ciclosporina A / Study about the feasibility of ovarian graft in rats' omentum pouch, using cyclosporine A

OBJETIVO: Estudo comparativo do enxerto autólogo e heterólogo de ovário na bolsa omental de ratas, utilizando ciclosporina A. MÉTODOS: No presente estudo, foram utilizadas 20 ratas distribuídas randomicamente em quatro grupos, denominados grupo controle (animais submetidos à ooforectomia); grupo A (enxerto autólogo de ovário); grupo H (enxerto heterólogo de ovário); e grupo C (enxerto heterólogo de ovário e tratamento com ciclosporina A). Todos os animais foram submetidos à ooforectomia bilateral. Um dos ovários removidos foi individualizado e enxertado no omento maior do animal. Os animais do grupo C receberam a dose de 10mg/kg/dia de ciclosporina por via subcutânea durante todo o período do experimento. Após um período de 33 dias, todos os animais foram submetidos a uma nova intervenção cirúrgica para identificação do leito receptor e retirada do ovário transplantado, além do útero e da vagina, seguido de eutanásia. As peças foram submetidas a processamento histológico e coloras pela hematoxilina eosina. RESULTADOS: Todos os grupos apresentaram epitélios vaginal e uterino com 1 a 2 fileiras de células cúbicas ou cilíndricas simples, núcleo arredondado e central. Houve também grande reação inflamatória em todo o enxerto, com áreas de necrose. Ocorreu óbito de um animal do grupo C no 20° dia do experimento. CONCLUSÃO: Conclui-se que o enxerto de ovário íntegro realizado em omento maior de ratas nesta amostra, independente do uso da Ciclosporina, não mostrou-se viável.

Avaliação endócrina e morfológica de transplante ovariano homógeno / Endocrine and morphological assessment of ovarian homologous transplantation

INTRODUÇAO: A insuficiência ovariana decorre de ooforectomia bilateral em diversas afecções do ovário, como neoplasia e sepse, além de quimioterapia, radiação pélvica e fatores relacionados à idade. Suas complicações sistêmicas, como insuficiências hormonais, podem ser de difícil controle. OBJETIVOS: Avaliar aspectos endócrinos e histológicos ovarianos após seu transplante ortotópico, sem anastomose vascular e submetidos à imunossupressão pela ciclosporina. MATERIAL E MÉTODO: Foram utilizadas 12 coelhas da raça Nova Zelândia Branca (n = 6) e Califórnia (n = 6), divididas em dois grupos: grupo 1 (n = 4), de controle, submetido apenas a laparotomia, sem outro procedimento cirúrgico; e grupo 2 (n = 8), submetido a ooforectomia bilateral e transplante ortotópico dos ovários, que foram trocados entre as duas raças de animais. De um lado, foi transplantado o ovário íntegro e, do outro, o ovário fatiado. Não houve anastomose vascular. As coelhas foram imunossuprimidas com ciclosporina (10mg/kg ao dia). No final do período de acompanhamento de seis meses, foram feitas dosagens de estradiol, progesterona, hormônio foliculoestimulante (FSH) e hormônio luteinizante (LH), além de estudo histológico de ovários, tuba uterina e útero. RESULTADOS: Os ovários transplantados estavam rodeados por tecido conjuntivo, bem vascularizados, mostrando folículos em diferentes estádios de desenvolvimento. A histologia tubária e uterina também foi preservada em ambos os grupos. A dosagem hormonal foi normal em todas as coelhas, indicando que, do ponto de vista endócrino, o ovário transplantado estava funcionando. O transplante ovariano homógeno ortotópico, sem pedículo vascular e submetido à imunossupressão pela ciclosporina, foi eficaz para a manutenção de hormônios ovarianos em níveis normais.

Gonadal Tumors Developed from Consecutively Transplanted Spleens Bearing Gonad Implants

This study was conducted by consecutively transplanting spleens, which had gonads implanted previously. A total of 84 cases for infantile testicles and 106 cases for ovarian follicles were performed. In the case of ovarian implants, the results were determined by the total number of follicle implants. A modified spleen transplantation technique called double implantation of ovarian follicles was applied to increase the amount of the implants. In this technique, an extra spleen is implanted into the potential donor so that the ovarian follicles can be implanted to two different spleens, doubling the amount of implants. Through consecutive spleen transplantation, we observed the results beyond a typical rat's life span. In many of these cases, we found more aggressive forms of malignant tumor, seminoma and dysgerminoma. We present the results and discuss possible pathogenic mechanisms of tumor formation.

Estudo experimental do enxerto autólogo de ovário em cadelas submetidas a ovariectomia e ovariosalpingohisterectomia / Experimental ovarian autograft in bitches submitted to ovariectomy and ovariohysterectomy

A pesquisa mostra os resultados obtidos em 10 cadelas mestiças das quais, 6 foram castradas e enxertadas com fragmento autólogo de ovário e 4 formaram os grupos de controle, somente castradas. Foram avaliadas no período pós-operatório de 12 meses através exames clínico e citológico, dosagem sérica de progesterona, observaçäo macroscópica do local de enxertia e exame histológico de fragmento do enxerto ovariano. Durante a fase pós-operatória de observaçäo, as fêmeas somente castradas e as enxertadas nao mostraram alteraçoes das mamas, com relaçäo ao peso comporal, utilizando o teste de Wilcoxon as somente castradas demonstraram diferença estatísticamente significante (p=0,0156). No tocante a citologia vaginal as fêmeas enxertadas apresentaram as quatro fases do ciclo estral. Através o teste de Wilcoxon concluiu-se que ocorre diferença significativa nas dosagens séricas de progesterona entre as fêmeas somente castradas (p=0.0082) e as enxertadas (p=0.0156). Após período de 12 e 36 meses foi realizada avaliaçäo macroscópica e exame histológico dos enxertos ovarianos, que mostraram diferentes etapas de foliculogênese.